IPNV Ag ELISA

Imunoenzymatická souprava k průkazu antigenu viru infekční nekrózy pankreatu (IPN) lososovitých ryb v orgánových homogenátech a kultivačních médiích infikovaných buněčných struktur.

Informace o soupravě:

• Specifické protilátky proti viru IPN jsou navázány v jamkách dělené mikrotitrační destičky.
• Souprava umožňuje provedení 96 vyhledávacích (screeningových) vyšetření, včetně kontrol.
• Soupravu je možno použít jednorázově nebo zpracovávat postupně menší soubory vzorků
• Citlivost metody (10² TCID₅₀/ 0,1 ml vyšetřované tekutiny) je dostatečná pro rutinní vyšetření terénních vzorků. 
• Celková doba vyšetření dle délky vzorků:
  • přes noc: výsledky do druhého dne
  • rychlý test: asi 2,5 hod.
• Souprava je ověřena ve Výzkumném ústavu veterinárního lékařství v Brně a Státních veterinárních ústavech.
• Souprava je schválena Ústavem pro státní kontrolu veterinárních biopreparátů a léčiv.
• Souprava je vyráběna v souladu se správnou laboratorní praxí (GMP).
• Expirace soupravy je 12 měsíců od data výroby.

Využití soupravy:

• Průzkum IPNV v orgánových homogenátech i v kultivačních médiích infikovaných buněčných kultur.
• Diagnostika nákazy.
• Kontrola ryb před přesuny.
• Kontrola ryb v karanténách (export, import).

Stručný pracovní postup:

1. Ředění a pipetování vzorků, kontrolních antigenů a RAIPNV do jamek:
   1. screening: 1+1 (vzorek + RAIPNV) přímo v jamkách mikrotitrační destičky
   2. titrace:      1+1 (vzorek + RAIPNV) až 1+255 přímo v jamkách mikrotitrační destičky
2. Inkubace:
   1. přes noc: 14–18 hod. při 4–8 °C
   2. rychlý test: 60 min. při 37 °C
3. Odsátí a promytí jamek 4 krát.
4. Dávkování Konjugátu (protilátka proti králičímu IgG značená peroxidázou).
5. Inkubace 60 min. při 37°C.
6. Odsátí a promytí jamek 4 krát.
7. Dávkování jednosložkového substrátu (TMB-Complete).
8. Inkubace 10 min. při laboratorní teplotě.
9. Dávkování Zastavovacího roztoku (H₂SO₄).
10. Fotometrické měření absorbance při vlnové délce 450 nm.
11. Vyhodnocení výsledků.