BLOT Treponema pallidum IgM

Westernblot souprava k detekci specifických protilátek třídy IgM proti separovaným antigenům Treponema pallidum v lidském séru nebo plazmě

Informace o soupravě:

• proteinové antigeny Treponema pallidum jsou elektroforeticky rozděleny, poté přeneseny na nitrocelulózovou membránu (jednotlivé WB stripy)
• v případě přítomnosti specifických protilátek dochází k jejich vazbě na jednotlivé separované antigeny
• za vysoce specifické jsou považovány antigeny o molekulové hmotnosti Mr = 47 kDa (TpN47), 17 kDa (TpN17) a 15 kDa (TpN15); za specifický je pak považován ještě antigen o molekulové hmotnosti Mr = 44,5 kDa (TmpA).
• v následujících krocích jsou navázané protilátky označeny Konjugátem a detekovány barevnou reakcí se Substrátovým roztokem (BCIP/NBT)
• souprava umožňuje 16 testů
• celková doba vyšetření je asi 3 hod.
• vysoká specifita a citlivost testu
• možnost softwarového vyhodnocení výsledků
• možnost postupného zpracování souprav, roztoky jsou v dostatečném nadbytku
• pro ověření validity testu obsahují WB stripy CUT-OFF linii, která slouží ke kontrole funkčnosti a citlivosti soupravy, navíc usnadňují vyhodnocení testu
• soupravy obsahují pozitivní a negativní kontrolu umožňující validaci testů
• expirace 12 měsíců od data výroby

Využití soupravy:

• diagnostika infekce T. pallidum; konfirmační test netreponemových (VDRL, RPR aj.) a treponemových (TPHA, ELISA aj.) testů
• konfirmace pozitivních a sporných výsledků

Stručný pracovní postup:

1. ředění testovaných sér (1+100)
2. pipetování ředěných sér a kontrol do jamek blotovací vaničky, vložení WB stripů
3. inkubace 60 min. při laboratorní teplotě na třepačce
4. promytí 3 × 5 min.
5. dávkování Konjugátu
6. inkubace 60 min. při laboratorní teplotě na třepačce
7. promytí 3 × 5 min.
8. dávkování Substrátového roztoku (BCIP/NBT)
9. inkubace 10 min. při laboratorní teplotě na třepačce
10. promytí 2 × 5 min. v destilované vodě
11. nalepení stripů do protokolu a jejich vysušení
12. vyhodnocení testu dle přiloženého protokolu nebo pomocí IMUNOBLOT software

Bezpečnostní listy